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标题: 细胞转染效率低的原因什么？ [打印本页]

作者: yulian30 时间: 2022-9-1 08:46
标题: 细胞转染效率低的原因什么？

　　细胞转染实验是指将DNA、RNA等外源物质通过电转染或化学转染的方式导入至细胞内的实验方法。不同的细胞系转染难度也各部相同，尤其是对生长条件要求较为苛刻的细胞，比如原代细胞的转染效率会远低于其他细胞。这里，盘点了一下那些可能导致细胞转染效率低的原因、转染试剂选择指南，测序方法以便提升您的细胞转染效率。

　　一、实验条件和操作方法不合规

　　正常情况下，做细胞转染实验前需要充足的准备，比如：细胞、DNA、转染试剂、培养基等。除了合规的实验条件以外，还有较为重要的就是实验操作方法，实验是一个较为严谨的过程，所以每一步的操作步骤都要严格按照操作规程和说明书进行操作，才能避免人为原因所造成的失误。

　　二、细胞活性不足，细胞密度不足

　　细胞的生长状态对细胞的转染效率的影响较大，细胞长势弱或者细胞的铺板密度过低，可能会转染试剂的细胞毒性而导致转染效率过低，甚至转染失败。因此细胞转染时机应在细胞的对数生长期，细胞的铺板密度一般以90%-95左右为宜。

　　三、转染的DNA或RNA浓度过低、质量过低

　　如果转染质粒的DNA或RNA的纯度不够，其中的其它外源物质可能会干扰细胞造成轻微的细胞毒性，进而影响到细胞的转染效率。正常情况下，用于细胞转染的质粒浓度应大于500ng/ul。在做RNA转染实验时，可以尝试Lip RNAiMAX Transfection Reagent试剂，这类试剂的细胞毒性较低，转染效率较高，并且操作简单易于优化，比较适用于高通量转染。

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